在生命过程中起着重要的作用，磷酸化位于多肽上的Tyrr、Ser，Thr，。目前磷酸化氨基酸一般用于磷酸肽的生成，目前用于单苯基磷酸化氨基酸。HBTU/磷酸化氨基酸通常用于连接磷酸化氨基酸HOBt/DIEA方法，但目前选择这种方法生成磷酸多肽也存在缺陷，特别是在生成多磷酸多肽或氨基酸较长的多肽时，连接效率低，最终产品纯度低。对于这种磷酸多肽，我们考虑选择后磷酸化方法。其生成过程是在多肽合成后，选择性地去除需要标记的氨基酸侧链保护基。对于Tyr，Thr可以直接使用侧链不受保护的氨基酸进行反应。-Ser（trt），在1%TFA可定量去除/DCM环境。

磷酸化后，用双苯基亚磷酰胺和四氮唑生成亚磷酰胺四唑活性中间体，连接到羟基，然后在过氧酸下氧化形成磷酰基，完成反应。

目前，多肽磷酸化修饰方法主要有两种：

（1）将适度保证的磷酸化氨基酸直接引入多肽序列；

(2)在树脂上生成多肽序列后，对其进行Ser、Tyr或Thr的侧链羟基进行磷酸化。

1)将适度保证的磷酸化氨基酸直接引入多肽序列:

也就是说，需要磷酸化的氨基酸将提前使用（Thr,Ser或Tyr）磷酸化和适当的保护，然后根据正常的SPPS生成过程将磷酸化缩小到多肽指数的选择点。该方法操作方便，已成为多肽企业磷酸化修饰的主要方法。

2)在树脂上生成多肽序列后，对其进行Ser、Tyr或Thr侧链羟基磷酸化：

磷酸化装饰采用磷酸化单一收缩到多肽中的方法时，由于侧链装饰中大基团产生的位阻，磷酸化氨基酸难以与肽链收缩，未来氨基酸的引入将更加困难，特别是在含有多个磷酸化位点的装饰中，生成将变得极其困难，最终产品成分复杂，难以分离，产量极低。

因此，当肽链中的多个位点磷酸化时，可以选择在树脂上生成多肽序列，然后对其进行Ser、Tyr或Thr的侧链羟基磷酸化:其生成过程主要是在多肽合成后有选择地去除需要识别氨基酸的侧链保护基。对于Tyr，Thr可以直接使用侧链不受保护的氨基酸进行反应。

侧链保护基1%TFA/DCM环境可以定量去除。选择这种方法时，可以利用双苄基亚磷酰胺和四氮唑生成亚磷酰胺四唑活性中间体，连接到羟基，然后在过氧酸环境中氧化形成磷酰基，完成反应。

写到最后:

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