固相合成主要是指将受保护的氨基酸衍生物连续添加到生长的肽链中，包括脱保护和洗涤步骤，以去除未反应的基团和副产物。如果每一步都完成了，就会形成全长肽，但这种情况很难发生，因为无论合成方案如何优化，总会有副作用或反应不良，从而影响肽的纯度。因此，提高肽纯度是固相多肽合成应用的关键点。

如何确定肽的纯度

反向高效液相色谱法通常用于测量肽纯度（RP-HPLC）和质谱法（MS），此外，氨基酸分析也可用于计算肽的产量或实际量。

固相多肽合成（SPPS）过程中的关键步骤

树脂选择：SPPS通常与1%二乙烯基苯基苯基苯乙烯基在一起（DVB）在交联聚苯乙烯上进行。替代品包括聚乙二醇（PEG）衍生物、树脂的选择会影响合成成功率和粗糙产品的纯度。连接到柱上的连接提供了生长肽和固相载体之间的可逆连接，并确定了最终产品的性质和可用的化学性质。接头的选择决定了最终产品中的C端官能组。

偶联化学：选择通常取决于合成速度，合成速度快，合成速度慢（DIC、HBTU）反应性较高(=不稳定)的偶联试剂（HCTU、HATU和COMU）。反应温度会影响偶联化学的选择。

反应温度:提高温度可能会加速合成和纯度，但并不总是如此。需要注意的是，基于微波的加热只是加热，微波本身对合成没有特殊影响。

监测脱保护：可通过实时紫外线监测进行监测，如脱保护步骤的效率对优化非常重要。

双耦合：通过双耦合、延长耦合时间或添加更多等效物来处理预测软件确定的困难耦合。

空间位阻：偶联试剂必须足够快，才能引入空间位阻氨基酸。

封端:这样做是为了阻断偶联反应后任何未反应的氨基，或将完整肽的N-端乙酰化。对于在合成困难或长肽过程中最小化缺失的产品和辅助净化过程非常有用。

溶剂使用：始终使用新鲜溶剂。重复使用溶剂会降低纯度。

选择能快速合成高纯度肽的多肽合成仪器

合成仪的选择是影响如何优化SPPS以获得所需肽纯度的主要因素之一。以下是一些建议，帮助您选择。

1.用于筛选方法和试剂的平行反应容器

2.脱保护监测

3.温度控制

4.最小交叉污染

5.稀有单体无需单次注射

写到最后：

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