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多肽合成主要途径

2023-11-10

主要有两种方法:化学合成多肽和生物合成多肽。

化学合成主要通过氨基酸和氨基酸之间的缩合来进行。在生成含有特定顺序的多肽时,由于多肽合成原料中含有单一的氨基酸,其官能度大于2,所以在合成多肽时,应暂时保护不需要反应的基团,然后才能进行成肽反应,从而保证多肽合成目标产物的定向性。多肽的化学合成分为液相合成和固相合成。

多肽液相生成主要分为两种策略:逐渐合成和片段组合。逐渐生成简单快捷的多肽片段,可用于合成各种生物活性多肽片段。片段组合法主要包括天然化学连接和施陶丁格连接。近年来,多肽液相片段合成发展迅速,在多肽和蛋白质合成行业取得了长足的进步。在多肽片段合成法中,多肽片段可以根据多肽片段的化学特定性或化学选择性自发连接,获得目标多肽。由于多肽片段中氨基酸残留物较少,纯度高,易于净化。

多肽固相合成:人工固相合成多肽通常从序列的C端逐一向N端添加氨基酸。固拓生物多肽合成是Fmoc或Boc的多肽合成(两种方法的合成过程是一样的,只是α-去除氨基保护基的方法不同)。

多肽合成主要途径

以Fmoc保护策略法为例。生成由以下步骤组成:

①悬挂树脂:根据订单使用并称相应量的树脂,将其放入反应釜中增溶备用。

②保护:Fmoc保护柱和单个保护基团必须使用20%piperidine来清除氨基。

③检验:检验是否已清除保护基,是否已露出氨基。

④激活和交联:下一种氨基酸的羧基被一种活性剂激活。活化的单一氨基反应与游离氨基反应交联,产生肽键。需要注意的是,氨基酸的投入并不是随意的。为了保证肽链合成的准确性;氨基酸、缩合剂和碱的比例。这里有一个参考比例。(规模(mol):氨基酸:碱=1:3:3:6)

⑤检验:检验所需氨基酸是否已连接。结果是阴性,判断氨基酸已完全连接。

⑥循环:反复循环②-⑤直至生成完成。

⑦将合成的肽从树脂切割和去保护。(Fmoc策略可以通过TFA(强酸)从树脂上切除多肽。)固相合成肽链。为了减少副反应的产生,选择的一些氨基酸侧链由保护基团保护。但是最终的成品只需要肽链,需要去除保护基。一般为了操作方便,切割液是根据肽链上不同的保护基提前准备好的。

⑧使用冰乙醚离心沉淀(至少要洗三次);洗涤,冷冻干燥。通过MS检测和HPLC检测获得粗品。

多肽的生物合成主要包括发酵和酶解。随着生物工程技术的发展,DNA重组技术主导的基因工程方法也应用于多肽合成。

写到最后:

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